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我們在進行二手熒光定量PCR儀實驗時會遇到的3個參數(shù)
更新時間:2022-10-23   點擊次數(shù):1262次
   二手熒光定量PCR儀是一種可以實時檢測核酸擴增的技術(shù),在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,利用熒光信號的變化對PCR過程進行實時監(jiān)控,以此實現(xiàn)對初始模板的定量分析。無需參比染料,無需定期校準(zhǔn),采用歸一化算法,快速準(zhǔn)確直觀的呈現(xiàn)實驗結(jié)果,用戶使用方便簡潔。我們在做熒光定量PCR時提到的三個名稱:擴增曲線,標(biāo)準(zhǔn)曲線,熔解曲線。
 
 ?。?)擴增曲線:擴增曲線有兩種展現(xiàn)形式,一種是線性,一種是對數(shù)形式。我們通常是用CT來推算樣品中樣品的濃度。CT值越高說明模板濃度越低。上面也詳細說明了原理,在這里就不過多贅述。
 
  (2)標(biāo)準(zhǔn)曲線:將已知濃度的樣品(標(biāo)準(zhǔn)品)經(jīng)過梯度稀釋后分別取樣進行熒光定量PCR,得到的一系列的Ct值,用這個Ct值與Log模板數(shù)對應(yīng)可以得到一個相關(guān)的曲線,我們叫標(biāo)準(zhǔn)曲線。可以用這個標(biāo)準(zhǔn)曲線中的一些參數(shù)來判斷這個熒光定量PCR體系的優(yōu)劣。
 
 ?。?)熔解曲線:Tm值,MeltingTemperature(解鏈溫度),PCR雙鏈產(chǎn)物的退火溫度。這兩個圖是在熒光定量PCR結(jié)束后,對產(chǎn)物進行逐步升溫時進行的監(jiān)測,可以看到在達到其解鏈溫度時,熒光信號會有一個忽然的下降。我們將測得的這個曲線叫做熔解曲線。理論上如果PCR得到特異性產(chǎn)物則只有一個Tm值,在溶解曲線上表示只有單峰存在。如果是多相峰,那么可以判斷產(chǎn)物不是單一的,發(fā)生了非特異擴增。
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